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3.4 La préparation des échantillons et le

chargement

Si les puits sont déjà en place, passez à l'étape 2.

Le cas échéant, lancer le gel d'empilement dans l'unité.

Calculer le volume de gel d'empilement monomère

solution: mesurer la distance, en cm, à partir du

haut du gel se résoudre à l'encoche de la plaque

d'alumine. (Cela devrait être d'au moins 2 cm, plus

si la profondeur de l'échantillon dans le puits est

anormalement élevé.) Multipliez cette distance par la

largeur de gel (8,3 cm) et l'épaisseur du gel (cm). Ce

produit est le volume requis en ml.

Désaérer la solution monomère gel d'empilement,

ajouter de catalyseur et un initiateur et verser. Utiliser

une pipette pour fournir la solution dans un coin de la

plaque, en prenant soin de ne pas piéger les bulles.

Insérer un peigne (à un léger angle pour empêcher

l'air de piégeage) dans le sandwich, permettant aux

côtés peigne à reposer sur les entretoises.

Superposer chaque gel avec une mince couche d'eau

saturée du n-butanol, de l'eau, ou un tampon de gel

dilué pour empêcher l'exposition du gel à l'oxygène.

Lentement offrir la solution de superposition d'une

seringue en verre munie d'une aiguille de calibre 22.

Appliquer la solution à proximité de l'entretoise sur le

côté du sandwich et lui permettre de s'écouler à trav-

ers la surface nu. Prévoir un minimum d'une heure

pour le gel à polymériser.

Préparer l'échantillon. Augmenter la densité échantil-

lon de liquide avec 10% de glycérol ou de saccha-

rose. Ajouter un colorant de suivi comme le bleu ou

rouge de bromophénol phénol.

Pour les gels de protéines de la SDD, utilisez un

tampon de traitement 2X pour dénaturer les deux

échantillons liquides et secs dans un tube à essai.

Pour des solutions de protéines liquides, ajouter un

volume égal de tampon 2X. Pour sécher les échan-

•

Remarque: Stacking résolution

gel est optimale quand

on le verse juste avant

l'électrophorèse.

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